磁珠法(新鲜组织冰冻组织)基因组DNA 提取详细步骤及方法

辉德顺

一、简介本方法提供了一种使用磁珠法从新鲜组织或冰冻组织中提取基因组 DNA 的详细步骤及方法。这种方法利用磁珠吸附 DNA 的特点，能够有效地从复杂的组织样本中分离出高质量的基因组 DNA .注意事项样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降；

◆ 需要自备材料：异丙醇、磁铁或磁架、1.5mL离心管(最好低吸附的离心管)； ◆ 整个过程请勿离心，以免磁珠不可逆聚集而影响提取效果。

二、所需材料

1.新鲜组织或冰冻组织

2．研磨仪

3．磁珠（带特异性抗体）

4.洗涤缓冲液

5．提取缓冲液

6．无水乙醇

7．离心管和离心机

8．移液器和枪头

9. 1.5 mL 离心管

10．电泳设备及染料

实验前准备

磁珠用前一定要充分混匀； ◆ 56℃加热源； ◆ 使用前需在Buffer TGW I中加入相应体积的无水乙醇。

1. 组织预处理：取动物组织10-50mg，于液氮中研磨破碎，然后将研磨后的组织转移到含有500 μl Buffer TGP 的离心管中,涡旋振荡混匀（若有匀浆机，组织液氮研磨后，在500 μl Buffer TGP中用匀浆机将组织彻底磨 碎，效果更佳），12000rpm离心1min，弃上清，沉淀备用。

2. 裂解：在上述组织沉淀中加入500 μl Buffer TGL，移液器吹散沉淀，涡旋振荡数秒，室温放置5-10 min（期 间不时颠倒混匀）；

3. 结合：加入500 μL 异丙醇，再加入磁珠悬浮液(MB) 30 μL（使用前充分重悬），颠倒混匀5分钟；将离心管 放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。

4. 漂洗: (1) 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer TGW 0,涡旋振荡5S，使磁珠重悬，将离心管放置 于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体，重复该步骤一次。 (2) 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer TGW I,涡旋振荡5S，使磁珠重悬,将离心管放置于 磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。重复该步骤一第 3 页次，待磁珠完全吸附后吸弃液体（液体一定要弃尽， 不然残留会影响下游实验），晾干2min。

5. 洗脱： 将离心管从磁力架上取下加入50-100 μl Buffer EB ，涡旋振荡结合移液器吹打磁珠，使磁珠完全分散在 液体中（一定要完全重悬磁珠，若未充分重悬会影响DNA得率），56℃ 放置5min

56℃ 放置5min（每隔2min振荡混匀重悬磁珠）,置于磁力架上，将上清DNA转移至一新的离心管中，放入-20 ℃ 保存备用（保质期为2 年）。

三、操作步骤

1．准备：将新鲜组织或冰冻组织切成小块，置于研磨仪中研磨成粉末。将粉末分装至1.5 mL 离心管中备用。

2．加入磁珠：根据组织量，按一定比例加入磁珠，轻轻摇晃混合均匀。磁珠会在组织样本中特异性地结合 DNA 。

3.洗涤：将混合物加入洗涤缓冲液中，用离心机离心，使磁珠与 DNA 分离。洗涤步骤需重复2-3次，以去除杂质和蛋白质。

4.提取：将洗涤后的磁珠加入提取缓冲液中，用磁力分离器吸附磁珠，使 DNA 从磁珠上释放出来。此步骤需在65℃下进行水浴10分钟。

5.沉淀：待冷却后，加入无水乙醇，用磁力分离器搅拌均匀后静置2分钟，使 DNA 沉淀。

6.离心：将混合物用离心机离心，收集沉淀的 DNA 。

7.洗涤：将离心管倒置，用吸水纸吸去多余的乙醇，然后在新的离心管中加入适量洗涤缓冲液，将沉淀的 DNA 转移过去，再次离心，彻底去除乙醇。

8.溶解：将 DNA 沉淀溶解于适量无菌水中，可在65℃下保温助溶。9．电泳检测：取少量 DNA 样品进行电泳检测，验证提取效果。

四、注意事项

1．为保证提取效果，组织样本需新鲜或冰冻保存。若样本不新鲜或存在坏死区域，会影响提取结果。2．在研磨过程中应保持器具清洁，避免交叉污染。3.提取缓冲液需根据磁珠说明书的要求正确配制和使用。

（本文AI辅助写作完成）