蛙坐骨神经-腓肠肌标本的制备

郑州四中 科学松鼠会

2023年10月23日，科学松鼠会的活动主题是制备蛙坐骨神经-腓肠肌标本。

任老师首先讲解实验目的、实验原理和实验步骤，然后由同学们分组实验。

实验目的：

1.掌握蛙的坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

2.观察组织的兴奋性、刺激与反应规律以及腓肠肌收缩的特点。

3.掌握并熟悉生理学实验常用器械的使用和基本操作技术。

实验原理：

1.牛蛙属于两栖动物，一些基本生命活动和生理机能与温血动物相似，其立体组织、器官保持活性所需的环境条件比较简单，易于控制和掌握，置于任氏液中可以维持较长时间的活性，所以生理实验中常用之为实验标本。

2.坐骨神经和腓肠肌都属于可兴奋组织，给予坐骨神经一个适宜的刺激可产生一个可传导的动作电位，引起其所支配肌肉（腓肠肌）的收缩。制作坐骨神经-腓肠肌标本可用于研究观察组织的兴奋性、传导性以及刺激与肌肉收缩等基本生理现象和过程。

实验材料：牛蛙

实验器材：

锌铜弓、不锈钢托盘（用于放置动物尸体）、玻璃培养皿、解剖盘、骨剪、直剪、有齿镊、塑料滴管、解剖针、玻璃分针、任氏液、棉线。

实验步骤：

1.破坏脑和脊髓

(1)取牛蛙一只，用自来水冲洗干净。

(2)左手握住牛蛙，用食指按压其头部前端，拇指按压背部，小指压住腿。右手持解剖针刺蛙毁髓。由于本次实验用的牛蛙较大，需要一位同学双手固定蛙体，另一位同学毁髓。具体方法是：将解剖针垂直从枕骨大孔刺入1mm，向上进入颅腔，左右搅动充分捣毁脑组织。然后将刺蛙针抽回至进针处，再向下刺入脊椎管，反复上下抽插捣毁脊髓。牛蛙四肢松软，呼吸消失，表明脑和脊髓已完全破坏。否则重复操作。

2.剪除躯干上部及内脏

在骶髂关节水平以上1.5-2.0cm处剪断脊柱，左手握住牛蛙后肢，用拇指压住骶骨，使头与内脏自然下垂，右手持普通剪刀，沿脊柱两侧剪除一切内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、脊柱以及脊柱两侧的坐骨神经。剪除过程中注意勿损伤坐骨神经。

3.剥皮和清洗器械

握紧脊柱断端（注意不要握住或压迫神经），右手握住其上的皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢的皮肤。把标本放入盛有任氏液的培养皿中。

将手及用过的剪刀、镊等全部手术器械洗净，再进行下面步骤。

4.分离两腿

用镊子夹住脊柱将标本提起，背面朝上，剪去向上突起的尾骨（注意勿损伤坐骨神经）然后沿正中线用剪刀将脊柱和耻骨联合中央辟开两侧大腿，并完全分离。将两条腿浸入任氏液的培养皿中。

5.制作坐骨神经-腓肠肌标本

取一蛙腿置于蛙板上的玻璃板上

(1)分离坐骨神经

将腿标本腹面朝上放置，用玻璃针沿脊柱旁分离坐骨神经，将坐骨神经连同2~3节脊椎骨用骨剪从脊柱上剪下来。再将标本背面朝上放置，把梨状肌及其附近的结缔组织剪去。循坐骨神经沟（股二头肌与半膜肌之间的裂缝处），找出坐骨神经的大腿段。用玻璃针仔细剥离游离至腘窝，然后剪去从脊柱根部至腘窝的所有坐骨神经分支。

(2)完成坐骨神经小腿标本

将分离干净的坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，然后在股骨中部剪去上段股骨，保留坐骨神经小腿标本。

(3)完成坐骨神经-腓肠肌标本

将上述坐骨神经小腿标本在跟腱处穿棉线结扎肌腱，于结扎处远端剪断跟腱。游离腓肠肌至膝关节囊，将小腿其余部分剪掉，这样就制得一个具有附着在股骨上的腓肠肌并带有支配腓肌的坐骨神经的标本。

结扎肌腱

6.检查标本兴奋性

用经任氏液润湿的锌铜弓轻轻接触一下坐骨神经，如腓肠肌发生迅速而明显的收缩，则表明标本的兴奋性良好，即可将标本放在盛有任氏液的培养皿中，以备实验用。

实验结果：

制得坐骨神经-腓肠肌标本如图所示

用经任氏液润湿的锌铜弓轻轻接触坐骨神径，可以观察到腓肠肌出现明显的收缩，当用锌铜弓直接接触腓肠肌的时候，也可观察到明显的收缩现象。

实验结论：

坐骨神经和腓肠肌属于可兴奋组织，刺激坐骨神经，能引起其所支配的腓肠肌收缩。

注意事项：

1.注意湿润标本，保持标本活性。

2.避免用金属接触神经，或夹伤神经；不要过度牵拉神经。

3.注意分离时要用玻璃分针，并且要顺着肌肉的走向游离，一定要把周围的结缔组织剥离干净。

4.每次刺激标本后使肌肉休息30秒，连续刺激不可超过5秒。

思考讨论：为什么锌铜弓一接触坐骨神经就能使腓肠肌发生收缩？

浸润任氏液的锌铜弓相当于一个原电池，轻触坐骨神经后锌铜弓得失电子形成电位差即电极电位，由于坐骨神经属于可兴奋组织，对电刺激敏感，达到一定刺激强度，可产生动作电位。坐骨神经产生的动作电位沿着神经纤维传导，到达神经末梢的神经肌接头，通过神经递质以电-化学-电的形式引起腓肠肌的兴奋收缩。

我们都成功制备了蛙坐骨神经-腓肠肌标本！