病理组织固定那些事儿

高医 · 病理科

Why病理组织为什么要固定 病理活体组织固定是病理质控流程的最关键步骤，是病理制片的第一步。有效的固定才能制作出优质切片，为病理诊断提供基础依据。如果组织固定不佳，造成组织变质腐烂、抗原丢失，将严重影响切片质量，也将导致诊断困难或无法诊断，并严重影响到后续免疫组化及基因检测结果的准确性。 When标本从离体到固定的时间 根据指南及共识，推荐送检手术标本在离体后0.5-1h及时固定，其中胃肠等空腔脏器因含蛋白酶及消化液等，建议在离体0.5h以内固定。 How病理科标本的规范化固定的具体要求 组织固定这一步是不可逆的，也是不可补救的，故此组织标本离体后，手术医生需配合完成标本的质控管理，按以下要求处理标本： 一、规范 规范地剖开标本。大标本应在不妨碍病理检查情况下切开固定。例如，有腔器官或肿物，要按其自然状态剪开，暴露黏膜面或内表面的病变；乳腺、肝、脾、肾等实质器官或结节状大肿物，沿其长轴每间隔1.5cm纵向平行剖开，切成书页状。 二、及时 标本离体后30分钟内必须用中性福尔马林固定液进行固定。 三、合适的固定液 常规标本用10%中性缓冲福尔马林液固定。 四、足量 固定液的量约为标本体积的5-10倍。 五、足够的固定时间 小标本的固定时间为4～6h，大标本为18～24h或更久。 六、特殊标本特殊固定 特殊标本要按指定要求进行处理。例如，睾丸穿刺标本要采用Bouin液固定；术中冰冻送检的标本则不需要固定，离体后用干纱布包裹，立即新鲜送检。 手术标本规范固定的合格标准包括三个方面： ①离体后30 min～1 h内固定； ②标本按照作业指导书的要求规范切开； ③固定液充足。以上三条同时达标，评估为“合格”，有任何一条不达标，即评估为“不合格”。 什么是甲醛？ 甲醛是一种常见的挥发性试剂，又称为福尔马林，10%浓度的中性缓冲液是组织处理过程中最常用的固定剂，主要用于保存和固定各种组织生物样本。甲醛在病理科的使用量非常大，尤其是在预处理、取材、脱水固定等步骤。 性状与成分: 甲醛为无色澄明液体，有刺激性特臭；10%中性福尔马林固定液主要由去离子水、福尔马林、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠成份组成。 原理与用途: 本品为醛类固定液，是一种交联性组织固定剂，主要通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用，能使细胞内物质尽量保持其生活状态时的结构和位置。本品采用磷酸氢二钠、磷酸二氢钠调节其pH值至中性，能最大限度地保护组织抗原。主要用于组织标本的保存、固定和防腐。 适用范围: 适用于人体、动物组织标本的固定。 固定液如何配置: 10%中性缓冲福尔马林： 甲醛 100ml 磷酸二氢钠 4g 磷酸氢二钠6.5g 蒸馏水 900ml 为什么首选10%中性福尔马林固定液？ 中性缓冲福尔马林渗透力强、组织收缩小，能使大多数抗原物质保存较好，提高免疫组织化学检测的阳性率，因此推荐作为首选固定液。 不固定病理标本会有什么后果？ 1、固定是病理制片过程中最重要的一步，因为这是不可逆的，也就是无法补救的。组织只有经过固定，才能完成随后的一系列制作，直至切片的最终完成。 2、如果组织固定不佳，造成组织腐烂、抗原失活，将影响切片质量，也将导致诊断困难或无法诊断，甚至影响免疫组化及基因检测结果准确性。因此及时、剖开、足量固定液的固定非常重要。 3、固定不佳还会造成细胞溶解破坏，组织扭曲变形；在室温下极易使细菌迅速繁殖而腐败，组织结构被破坏，不利于形态学的诊断。 4、会导致标本自溶、腐败、干涸等，从而影响病理诊断的准确性。精准的病理诊断是实现精准医疗的关键步骤，而病理组织固定是病理诊断的第一环节。