细菌培养鉴定案例分享之肺炎链球菌

柒壹柒

针对肺炎链球菌检测常采用羊血平板，有助于其溶血特征的识别和进一步鉴定，而且初代分离应置5%~10%CO2的环境下培养。在血平板上，肺炎链球菌的菌落直径0.5~1.5mm，灰白色、半透明、表面光滑（有些菌株可表现为粘液状）扁平，周围环绕着草绿色溶血环。培养或放置24h以上的培养物还会由于肺炎链球菌的自溶作用而致菌落中央塌陷而边缘隆起，而呈脐窝状。

2019年9月4日，普外科送检的某病人痰培养标本，接种于血琼脂平板35摄氏度，培养24小时后，出现了细小圆形，中央呈脐窝状，v灰色，扁平，直径1.0mm左右的菌落，周围有草绿的溶血环.触酶试验阴性，对Optochin敏感.这张图片为原始血琼脂平板上菌落生长情况，菌落典型，生长良好.

这张图片为Optochin试验，肺炎链球菌对Optochin敏感是其重要鉴定依据.

该标本涂片后肺炎链球菌革兰染色后的形态，典型的肺炎链球菌为革兰染色阳性球菌，直径约1μm。常呈双排列。菌体成矛头状，宽端相对，尖端向外。在痰、脓液标本中可呈单个或短链状。有毒株在体内形成荚膜。普通染色时荚膜不着色，表现为菌体周围透明环。无鞭毛。不形成芽胞。菌体衰老时，或由于自溶酶（autolysin）的产生将细菌裂解后，可呈现革兰染色阴性。本菌营养要求较高，需在含血液或血清的培养基中生长。在固体培养基上形成小圆形、隆起、表面光滑、湿润的菌落。培养初期菌落隆起呈穹窿形，随着培养时间延长，细菌产生的自溶酶裂解细菌，使菌落中央凹陷，边缘隆起成“脐状”。表面活性剂如胆汁或脱氧胆酸盐可激活自溶酶，加速菌体自溶。

另外一位病人已从ICU转入脑外，痰培养结果为：肺炎链球菌，菌落形态与典型菌落有区别，为湿润，透明的黏液性菌落.触酶试验阴性，对Optochin敏感.

原始平板，肺炎链球菌有自溶的情况，所以，该平板在48小时后，菌落形态已经不典型了.

将之前平板中的肺链分纯做Optochin试验，试验结果为敏感，可以看到分纯平板上的菌落生长良好.进一步需要我们做的便是手工纸片药敏结果的分析.

该标本涂片后革兰染色肺炎链球菌形态，矛头状，成双或链状排列，痰标本中多数成双排列.肺炎链球菌革兰染色应为革兰阳性球菌，但此标本中菌落为黏液型肺链，粘多糖包裹的肺链革兰染色容易脱色，故颜色呈玫红色而非紫色.

参考2019年最新抗微生物药物敏感性试验执行标准，对肺炎链球菌药敏试验所贴药敏为：万古霉素，红霉素，四环素，左氧氟沙星，氯霉素，利福平，克林霉素，青霉素.

普外患者肺炎链球菌K-Ｂ法药敏结果：氯霉素（25mm）敏感，红霉素（0mm）耐药，克林霉素（10mm）耐药，利福平（35mm）敏感，左氟沙星（20mm）敏感，万古霉素（25mm）敏感，青霉素G（28mm）敏感，四环素（12mm）耐药.

ICU转脑外患者肺炎链球菌K-Ｂ法药敏结果：氯霉素（30mm）敏感，红霉素（14mm）耐药，克林霉素（22mm）敏感，利福平（35mm）敏感，左氟沙星（20mm）敏感，万古霉素（27mm）敏感，青霉素G（34mm）敏感，四环素（20mm）耐药.

肺炎球菌广泛分布于自然界，常定植于人类鼻咽部，健康儿童鼻咽部携带率为27-85%，在发展中国家儿童携带率可高达85%，在发达国家携带率在27%左右 。肺炎球菌是一种条件致病菌，通过飞沫传播，传播形式隐匿，当抵抗力下降时易侵袭而入，肺炎球菌可透过黏膜防御体系从咽喉部逐步扩散，它可进入下呼吸道引起肺炎，可穿过血脑屏障引起细菌性脑膜炎，也可穿过肺泡上皮细胞、侵袭血管内皮细胞进入血液引起菌血症。

肺炎球菌性脑膜炎引起后遗症的比例高，约每3个肺炎球菌性脑膜炎患儿中超过1个会出现后遗症 ，表现为智力低下、脑瘫、耳聋等，为患儿和家庭带来沉重的生理和心理负担。

肺炎球菌性疾病是全球严重的公共卫生问题之一，也是导致我国5岁以下儿童死亡的重要原因，另外，这也是其他免疫力低下或障碍人群如老年人等易发生的疾病。临床治疗以抗生素为主，由于抗生素的广泛应用，肺炎链球菌的耐药性问题日益严重，为临床治疗带来挑战。因此，采用肺炎球菌疫苗预防肺炎球菌性疾病，尤为必要和迫切。

针对临床送检标本中，肺炎链球菌的检出一直是检验科微生物室重要把控的检验工作，临床的老师可以根据患者自身临床症状，结合临床表现，送检细菌培养的标本，合格的细菌培养标本及时送检可以提高阳性的检出率！