谁在折磨我的腹痛？——上篇

夏天

3月18日，周一，刚从外地讲课回来的陈东科老师接到肾内科医生的电话，请求急查病人赵某的腹透液是否有真菌。经询问得知该病人规律透析三年，十天前怀疑感冒身体不适，自行服药后情况并无明显改善，六天前发现腹透管破裂于肾内门诊就诊后更换新腹透管，一天前患者身体状况不佳并发现腹透液变浑浊，遂入院治疗。在14日已送检腹透液(打入血培养瓶)，16日已报阳，血培养涂片镜下见有隔菌丝，18日平板上的丝状真菌已经长起来了。

乳酸棉酚蓝染色

但是14日送检的腹透液革兰染色并未发现细菌或真菌，主治医生想通过直接镜检再次确认之前阳性报警的腹透液是否为致病菌，以排除污染等。得知病人仍然有腹水可取，东科老师建议立即送份腹水来实验室，让两次腹水的镜下结果对比，更有可信度。事不宜迟，将14日的标本离心后取沉渣分别革兰与荧光染色，但革兰染色镜下并未发现可疑物，而荧光染色下找到了有隔的真菌菌丝，但量不多。(后面有大量东科老师拍摄的镜下美图和操作小视频)

真菌荧光染色发现几处真菌菌丝

半个小时后新取的腹水送至微生物室，离心后取沉渣荧光染色找到较多小的有隔菌丝

新送的腹水第一次取沉渣革兰染色，未发现真菌菌丝或孢子。可荧光染色有菌丝，于是再次取沉渣涂片革兰染色，阅全片终于找到了一处有着明显的菌丝的地方

革兰染色与荧光染色间的对比说明两种方法存在特异性差异。革兰染色中当菌丝不是长得明显的形态时，可能就会把它当成粘液丝或染液杂质漏检了。而真菌荧光染色法通过使用化学荧光增白剂，与真菌细胞壁的多糖成分(如纤维素、几丁质等）非特异性结合，在荧光显微镜的紫外激发光下呈现荧光。该方法敏感性高、特异性高，检出率高，使用效果好，是值得广大微生物实验室推广的。

陈老师及时与临床医生沟通，医生特别感激因其发现与临床症状完全符合，当即决定对患者进行急诊手术拔管。

但因手术病房繁忙，晚上十点半左右陈老师才收到医生的回信，导流管已取出，可见管壁上有小菌落，陈老师叮嘱医生将其送检真菌培养和涂片。

第二天上班陈老师带着进修生们处理已在肉汤中培养了一夜的腹腔导流管。

工具:消毒的镊子、一次性痰盒，一次性5毫升注射器、载玻片、盖玻片，10%KOH等

可见管壁内一节一节的白色小菌落，几乎将导管内腔堵死。

因内生物紧紧地贴在导管内壁，用注射器抽取管内的肉汤冲洗管道，但很难冲下来。

多次试验均未成功，陈老师想了下叮嘱我们把剪刀在酒精灯上过火消毒后用剪刀把管道剪断，再用一次性注射器的针头把里面的菌落挑出来

挑出来的小菌落，好大一块

东科老师操作小视频

全部取出来的导管内小菌落，量还真不少

分别接种在SDA和全封闭式一次性小培养基上，以便后续观察。

介绍一下——全封闭一次性小培养基 (下篇培养真菌时需用上)

全封闭式一次性真菌培养基，不直接与丝状真菌接触，大大降低了生物安全危害，可直接将培养基放在显微镜下观察(低、中、高、油镜均可），不损伤内部结构，观察完后还能收起来继续培养，对后续生长无任何影响。若有需要还可将乳酸棉酚蓝染液直接滴入小培养内，可直接镜下观察被染上色的菌落立体形态。

随后进行压片镜下观察，取一块小菌落在载玻片上

取10%的KOH，加一滴在菌落上，消化一两分钟后，盖上盖玻片，用镊子轻压盖玻片表面，使菌丝团散开，以便镜下观察

东科显微镜拍照神器用起来

镜下可见大量菌丝，多如蚕丝，触目惊心。还可见量较多无色镰刀样的小孢子

直接压片后镜下观察小视频

另取一小菌落进行荧光染色后，形态更加明显

镰刀样子的小孢子

美丽的形态，无情的“杀手”

荧光染色镜下小视频

每一位微生物工作者应该都深有同感，完美地处理了一例感染性导管内标本，既找到了致病菌又为临床为病人解决了难题，是一件多么开心的事情，这时就连平时工作时一本正经的东科老师也调皮起来了(偷偷爆两张照）

这位可爱的老师有木有萌萌哒✌✌

晚上医生微信咨询时，陈老师又将白天处理的图片发过去，让临床医生更直白地了解患者的致病菌

因篇幅原因“谁在折磨我的腹痛”-上篇 暂告一段落，小小透露下后续的内容有波折更加精彩……

福利——东科老师拍摄的镜下美图