《2018年第六届上海国际男科论坛 暨稀少精子手把手培训班》 世上无难事，只要肯登攀

枫叶

2018年5月3日～6日第六届上海国际男性健康论坛，亚洲男科学协会男性不育学术研讨会顺利开幕了。参会代表人数非常火爆，来自台湾，美国以及国内的代表超出预计有五百多人呐！此次会议除了三天半日程满满的内容外，还安排了四个报名火爆的手把手培训班。

其中2018稀少/单精子冷冻手把手培训班随着第六届上海国际男性健康论坛圆满闭幕，于2018年5月6日下午在上海交通大学附属第一人民医院强势开班。

本次培训班改变了以往的方式，采用先理论讲课，部分讲课穿插在大会的内容中，与男科显微取精内容紧密衔接，会议结束再进行为期三天的手把手培训。

刘锋主任首先针对不同来源的精子如何处理及规范化操作，给各位代表进行了深入细致的讲解。强调了实验室人员间规范操作的重要性。

胡双钢博士，结合自己多年来的实验室操作经验，给大家分享了他在临床工作中如何解决冻融精子ICSI受精失败的策略

薛松果博士，将自己丰富的临床实践给学员们分享了各种稀少精子不同载体的冻融过程的优缺点，还详细介绍了他对单精子冷冻的体会。

朱子珏博士，在单精子冷冻安全性实验方面做了一些摸索，本次会议上把自己的研究结果给各位学员做了分享，并强调了单精子冷冻操作中应该注意的问题。

胡剑麟博士，将自己在德国科隆大学交流了解到的玻璃化冷冻精子的概念分享给了各位代表。还对低温生物学的理论做了很详细的解析

公跃华老师，针对稀少精子的冻融方法在临床工作应用上的结局了一个阶段性总结

陈威博士，介绍了他在实验室工作中，使用单精子冻融的精子对受精后，其卵裂，囊胚形成率，可使用胚胎率做了中肯的评价，并对目前的单精子冷冻方法做了一些改进。

来自于上海市第一人民医院生殖医学中心实验室的张箴波主任，就单精子冷冻技术用于克氏综合症治疗和基础研究方面给大家做了分享。

德国美天旎公司的姜博士，专门为大家介绍了磁珠法分选凋亡精子，可提高精子质量获得优质胚胎。

理论班上最后的授课人是江苏克劳特低温技术有限公司创始人孙大明博士，以小型天然气液化技术为例，介绍了液化天然气（LNG）是清洁能源，但液化天然气在生产、储运和使用过程中产生的蒸发气（BOG）排放到大气中所造成的危害正逐渐积累和放大。液化天然气的BOG排放不仅造成巨大经济损失，而且带来严重的安全环保问题，排出的天然气主要成分是甲烷（CH4），甲烷的温室效应约是等质量二氧化碳的27倍，并且在周围大气中产生天然气聚集，易爆易燃。斯特林制冷技术可以直接将天然气挥发气液化回收，特别适合解决这一问题。

稀少精子冻融保存理论培训丰富而接地气的内容吸引了来自全国各地的学员。理论课结束后，我们接着安排了三天的稀少精子冻融手把手的操作培训

有关文献报道，目前在男性不育人群中无精子症的发生率约占人口总数的1%，约占男性不育症的15%。其中非梗阻性无精子症（NOA）约占无精子症的60%。而部分NOA是可以发现睾丸残存的局灶性生精位点的，这时只能通过显微外科的手法来才能获得精子。

实验室技术人员的主要任务，就是不要轻易浪费一条可用的精子，用它与健康的卵子结合，给无精子症患者带来生育一个自己孩子的希望

微量精子冷冻操作方法

将显微手术取得的有限睾丸组织立即进行处理，将获得精子离心浓缩，接着加入培养液培养来提高精子的活力，让其运动。最后加入稀少精子冷冻保护剂，利用超低温(-196℃)技术冷冻在液氮中。通过微量精子冷冻的方式将这些精子冻存，待需要的时候再提取使用。

李铮教授，在培训班开始及培训期间，都会亲临课堂，给学员们讲解精子的发生，以及无精子症的临床分类，并反复强调微量精子冻存的临床应用意义。

本次培训班学员，多来自全国各地生殖医学中心，她们对胚胎实验室技术娴熟，对微量精子冷冻操作细节也格外关注。

三天的培训当中，学员们不仅从理论课中学到了稀少精子冷冻有关知识。更重要的是每人都可以亲手操作，体会操作细节。

薛云婧老师在指导学生实验操作

通过学员们头一天的操作实践，复苏结果统计时让大家非常吃惊的看到，同一份样本复苏后的浓度和活力差别很大，为什么会出现这样的结果呢？

针对存在的问题，刘锋主任为学员们做了分析、

1. 过失误差  过失误差是一种与实际事实明显不符的误差，误差值可能很大，且无一定的规律。它主要是由于实验人员粗心大意、操作不当造成的，如计数不准，操作失误等。

2．操作误差  操作误差是由于不正确的实验操作所致。

（1）取样时沉淀的样本未注意混匀，混匀过分或不充分，有气泡

（2）计数时样品沉淀时间过短或过快，复苏时没擦净麦管外的冰霜即丢进水箱里等等。

3．主观误差（个人误差）

这种误差是由分析人员本身的一些主观因素造成的。

例如，培训时人员之间对该技术掌握的程度快慢，对实验操作的理解不同；操作时的实验准备工作未注意，人为造成冷冻复苏操作时间过长等。

经过动手操作和复苏结果评价，让学员们体会到微量精子冷冻看着简单，但要冻的好不是一件容易的事！

培训班上我们还进行了单精子冻融操作培训，薛云婧老师为大家做了冷冻操作和复苏的演示，后来每个学员都有机会分别上机实际体验。有的学员操作复苏率达到百分之百，这表明我们学员的显微操作技术非常娴熟。但也有学员操作复苏后精子完全不动的。结果说明，细节决定成败。

微量精子冷冻主要用于对于显微男科获取的精子进行冷冻，如细针穿刺(FNA)、经皮睾丸活检、开放睾丸活检、睾丸精子获取（TESE）、显微睾丸速精术等等。为了让学员们真正了解显微取精和取精后实验室人员处理流程，本次培训还安排学员们到手术室参观学习

显微镜下可以清楚的看到睾丸中的曲细精管

也许就在这管子里发现了精子呢！

手术过程，实验室人员需要把获得的组织尽快用生理盐水冲洗组织上带着的血液，减少红细胞对观察精子造成的影响。然后将组织用显微外科剪刀快速剪碎，再用套管针充分抽吸，让曲细精管中的精子完全释放出来，再取样置培养皿转移倒置显微镜下观察有无精子……

实验室的同事接到标本后，要尽快的在显微镜下用培养皿再复合一次精子的数量，然后选择合适的载体进行冷冻。洪艳老师为学员们演示了睾丸组织的冻存操作。

目前，精子的来源涵盖了输精管、附睾和睾丸。需要注意的两点是：（1）IVF和ICSI可能避免了许多自然受精中的自然选择屏障，也许会把父辈导致不育的异常缺陷传至后代。这是一个伦理学的大问题，特别是如Klinefelter综合征等X连锁疾病，可能在其孙子辈重现，导致可治疗的男性不育症。（2）近期的资料显示，利用该技术生育的后代，其性染色体的异常率，较自然妊娠的后代高4倍。

睾丸精子没有经过附睾成熟变形阶段，精子染色质去浓缩及激活过程较附睾精子会有差别。这一切问题都待我们后期研究，解决。

一周培训班结束了，李铮教授亲自给每位学员进行了考试，颁发证书！

到了分手的时候，短短几天的学习让大家结下了不解之缘，纷纷留下微信和电话，表示今后工作中要加强联系，多写美篇。

　人生最精彩的不是成功的瞬间，而是坚持的每一个过程。　　

成功没有捷径，上海交通大学第一人民医院男科李铮教授团队的每一位医生，研究生，实验室技术人员在日常繁忙的临床工作中，潜心研究，不断改良，在经历过无数次失败后，不断改进摸索稀少精子和单精子冷冻方法，包括精子冷冻前的评估，冷冻载体的选择，冷冻方案的制定，精子专用培养液，精子冷冻保护剂，精子冷冻载体，冷冻降温方法和速率，精子复苏方法，复苏时间以及精子体外培养方法等，最终建立了一套自己完整的体系及操作技术流程，为不断提高稀少/单精子冷冻的复苏率在男科领域提供了科学的理论依据和技术操作方法。

尽管我们的工作还存在着各种问题，但世上无难事 只怕有心人！相信未来会做得更好！！

我是刘锋，生殖医学主任技师。热爱生殖医学实验室工作，从事本专业技术已29年。愿意与各位同道交流，并欢迎各位亲们给予关注